細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)目的：研究趨化因子或其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)對(duì)細(xì)胞侵襲的影響。

一、準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)以及包被

　　從冰箱中取出Assembling tool 以及 CIM plate 上板。拆開(kāi)上板，可見(jiàn)板上和蓋子上均有藍(lán)點(diǎn)標(biāo)記，把板放在 Assembling tool 上。

　　1、首先進(jìn)行 Matrigel 包被，每孔內(nèi)加入 50 µl matrigel ，每做完一個(gè)梯度，即 4 個(gè)孔后， 馬上從孔內(nèi)輕輕吸出 30µl Matrigel。

　　2、空白對(duì)照的四個(gè)孔同樣加入 50µl 的無(wú)血清培養(yǎng)基，然后吸出 30µl。

　　3、蓋上蓋子，將整個(gè) Assambling tool 連同板子 ，放入培養(yǎng)箱中孵育 4-5 小時(shí)，使 Matrigel凝結(jié)。

二、組裝 RTCA CIM Plate-16 以及測(cè)量 CI 背景值

　　1、取出CIM plate 下板，放在 Assambling tool 第二個(gè)槽內(nèi)，下板中加入160µl 預(yù)溫好的完全培養(yǎng)基。將 CIM-Plate 16 Assembly Tool 旋轉(zhuǎn) 90 度，將上板拿起，水平移到下板上方，檢查安裝是否緊扣在一起。

　　2、在上板中每孔加入 30 µl 無(wú)血清培養(yǎng)基，蓋上上板蓋子將整塊 CIM-Plate 16 放入 RTCA DP 分析儀。放在培養(yǎng)箱中平衡一個(gè)小時(shí)。

　　3、一小時(shí)后，進(jìn)入 schedule 頁(yè)面，點(diǎn)擊開(kāi)始按鈕。背景值測(cè)完后，顯示 ready for starting next step.回到Message 頁(yè)面，看是否有任何報(bào)錯(cuò)信息。

三、準(zhǔn)備細(xì)胞，并加入 RTCA CIM Plate-16 上腔

　　1、取出CIM plate，重新放回到超凈臺(tái)中的 Assambling tool 上，每孔加入 100 微升含 20000 個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液。

　　2、為了避免培養(yǎng)箱內(nèi)由于溫差產(chǎn)生蒸騰作用而引起邊緣效應(yīng)，將 CIM 培養(yǎng)板，在常溫下靜置半個(gè)小時(shí)。
四、運(yùn)行實(shí)驗(yàn)

　　將 CIM plate 重新放回RTCA DP 分析儀上，看到提示 plate scanned, connection is OK 后，點(diǎn)擊開(kāi)始第二步。這時(shí)機(jī)器開(kāi)始每 15 分鐘檢測(cè)一次孔內(nèi)細(xì)胞的遷移的情況。

五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

　　在 Cell Plot 頁(yè)面，選擇顯示平均值以及標(biāo)準(zhǔn)差，點(diǎn)擊 add ,可見(jiàn)不同組得到的實(shí)驗(yàn)信號(hào)。當(dāng) Matrigel 濃度較大時(shí)，細(xì)胞侵襲越困難，而無(wú)血清培養(yǎng)基對(duì)照孔內(nèi)，細(xì)胞侵襲的信號(hào)就非常明顯。根據(jù)包被 Matrigel 的濃度由高到低，細(xì)胞侵襲能力逐漸增強(qiáng)。