一、手足口病動(dòng)物模型構(gòu)建實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇

1. 常用動(dòng)物模型及特點(diǎn)

2. 選擇依據(jù)

• 研究病毒毒力 → 乳鼠模型（快速、低成本）

• 研究神經(jīng)致病性 → 幼齡倉(cāng)鼠 或 SCARB2-Tg小鼠

• 疫苗/藥物評(píng)價(jià) → 樹(shù)鼩 或 靈長(zhǎng)類

二、手足口病動(dòng)物模型構(gòu)建病毒株準(zhǔn)備

1. 常用HFMD相關(guān)病毒

• EV-A71（C4亞型、B5亞型等）

• CV-A16（主要致輕型HFMD）

• CV-A6、CV-A10（新興流行株）

2. 病毒擴(kuò)增與滴定

• 細(xì)胞培養(yǎng)：

• RD細(xì)胞（橫紋肌肉瘤細(xì)胞，用于EV-A71/CV-A16）

• Vero細(xì)胞（用于部分CV-A6株）

• 病毒滴度測(cè)定：

• TCID??（細(xì)胞病變法）

• 噬斑試驗(yàn)（PFU/mL）

三、感染途徑與劑量

1. 感染方式

2. 感染劑量

• 乳鼠（EV-A71）：

• 顱內(nèi)注射：103–10? TCID??

• 腹腔注射：10?–10? TCID??

• SCARB2-Tg小鼠：10? PFU（肌肉注射）

• 樹(shù)鼩（CV-A16）：10? TCID??（鼻腔接種）

四、模型評(píng)估指標(biāo)

1. 臨床癥狀

• 乳鼠：

• 肢體麻痹、弓背、體重下降（>15%需安樂(lè)si）

• 致死率（感染后5–7天觀察）

• 倉(cāng)鼠/樹(shù)鼩：

• 足墊紅腫、行動(dòng)遲緩

• 神經(jīng)癥狀（震顫、抽搐）

2. 病毒學(xué)檢測(cè)

• 組織病毒載量（qPCR檢測(cè)病毒RNA）：

• 腦、脊髓、肌肉、腸道

• 病毒分布：免疫組化檢測(cè)病毒抗原（如EV-A71 VP1）

3. 病理學(xué)分析

• 中樞神經(jīng)系統(tǒng)：

• 腦干、脊髓前角神經(jīng)元壞死（HE染色）

• 小膠質(zhì)細(xì)胞激活（Iba1免疫染色）

• 肌肉組織：肌纖維變性、炎癥浸潤(rùn)

4. 免疫應(yīng)答

• 體液免疫：ELISA檢測(cè)中和抗體（如抗-EV-A71 IgG）

• 細(xì)胞免疫：

• 流式檢測(cè)CD4?/CD8? T細(xì)胞浸潤(rùn)

• 細(xì)胞因子（IL-6、TNF-α）水平

五、注意事項(xiàng)

1. 生物安全

• EV-A71需在 BSL-2 實(shí)驗(yàn)室操作，動(dòng)物尸體需高壓滅菌。

2. 動(dòng)物福利

• 乳鼠模型需密切監(jiān)測(cè)（每12小時(shí)記錄癥狀）。

• 設(shè)置人道終點(diǎn)（如癱瘓、體重下降>20%）。

3. 對(duì)照設(shè)置

• 陰性對(duì)照：PBS或滅活病毒接種

• 陽(yáng)性對(duì)照：已知高毒力株（如EV-A71 C4）

六、常見(jiàn)問(wèn)題與優(yōu)化

1. 乳鼠模型個(gè)體差異大

• 解決方案：

• 使用同窩幼鼠，增加樣本量（每組≥8只）

• 標(biāo)準(zhǔn)化接種體積（顱內(nèi)注射≤5μL）

2. 成年動(dòng)物不敏感

• 策略：

• 使用免疫抑制劑（如環(huán)lin酰胺）

• 選擇轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（如SCARB2-Tg小鼠）

3. 缺乏自然傳播模型

• 替代方案：

• 共飼養(yǎng)感染與未感染乳鼠（通過(guò)糞便/唾液接觸）

• 氣溶膠暴露倉(cāng)鼠（需專用設(shè)備）

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